Український часопис ветеринарних наук

Поширення Toxoplasma gondii серед великої рогатої худоби в окремих регіонах України

Владислава Іванівна Сторожук, Гліб Валентинович Міхаровський, Олена Журенко, Олександр Вальчук, Богдан Юрійович Нижник, Ксенія Миколаївна Третьякова, Марина Владиславівна Галат
Завантажити статтю
Анотація

Toxoplasma gondii як збудник токсоплазмозу, хвороби яка є спільною як для людини, так і для великої рогатої худоби, є надзвичайно поширеним у світі і завдає як економічних збитків так і становить загрозу здоров’ю людини, зокрема при вживанні у їжу продуктів тваринного походження. Саме тому мета роботи полягала у дослідженні поширеності збудника токсоплазмозу у великої рогатої худоби окремих областей України. Для проведення досліджень до лабораторії надсилали зразки цільної крові або сироватки великої рогатої худоби різного віку і статі з господарств Київської, Житомирської, Хмельницької та Львівської областей України. У сироватці крові тварин визначали наявність сумарних антитіл до Toxoplasma gondii. Для цього використовували метод імуноферментного аналізу. Загалом поширеність T. gondii серед великої рогатої худоби Київської, Житомирської, Хмельницької і Львівської областей України за результатами проведених досліджень становила 10,3 % (95 % довірчий інтервал: 6,7–15,1). Водночас дослідження тварин здійснювалось у два етапи, у 2014 і 2018 роках, а поширеність відрізнялася незначно. Так, у 2014 році за результатами досліджень зареєстровано позитивну реакцію до T. gondii в 10 зразках або 13,9 % (95 % довірчий інтервал: 7,3–23,4), у той час, як у 2018 році цей показник становив 11 зразків або 8,4 % (95 % довірчий інтервал: 4,5–14,1) досліджених тварин. Водночас за 2014 і 2018 роки досліджень встановлено, що найвищий рівень поширеності збудника токсоплазмозу відзначався серед тварин господарств Житомирської та Київської областей, відповідно 11,9 % (95 % довірчий інтервал: 4,5–24,4) й 11,0 % (95 % довірчий інтервал: 5,9–18,3). Причому вірогідне підвищення рівня поширеності T. gondii відмічали у тварин з віком. Зокрема, серед тварин віком до шести місяців, із 65 досліджених зразків сироватки крові позитивно прореагували до збудника хвороби три (4,6; 95 % довірчий інтервал: 1,2–12,1). У той час, як у групі тварин старших за три роки (49 корів), які позитивно прореагували, виявилися 10 зразків (20,4; 95 % довірчий інтервал: 10,9–33,4), у порівнянні з попередньою групою тварин Р-значення становило 0,0114. Отже, отримані дані дають можливість зрозуміти рівень поширеності збудника токсоплазмозу серед великої рогатої худоби на території України, що своєю чергою дозволить попередити захворювання людей при вживанні в їжу м’ясних і молочних продуктів позитивно реагуючих тварин

Ключові слова

токсоплазмоз, серологічні дослідження, імуноферментний аналіз, Київська, Житомирська, Хмельницька, Львівська області

ЦИТУВАТИ
Storozhuk, V., Mikharovskyi, M., Zhurienko, O., Valchuk, O., Nyzhnyk, N., Tretiakova, T., & Galat, G. (2022). Distribution of Toxoplasma gondii among cattle in certain regions of Ukraine. Ukrainian Journal of Veterinary Sciences, 13(1), 71-79. https://doi.org/10.31548/ujvs.13(1).2022.71-79
Використані джерела

[1] Opsteegh, M., Spano, F., Aubert, D., Balea, A., Burrells, A., Cherchi, S., Cornelissen, J., Dam-Deisz, C., Guitian, J., Györke,  A., Innes,  E.A., Katzer,  F., Limon,  G., Possenti,  A., Pozio,  E., Schares,  G., Villena,  I., Wisselink,  H.J., & van der Giessen, J. (2019). The relationship between the presence of antibodies and direct detection of Toxoplasma gondii in slaughtered calves and cattle in four European countries. International Journal for Parasitology, 49(7), 515-522. doi: 10.1016/j.ijpara.2019.01.005.

[2] Sah, R.P., Dey, A.R., Rahman, A., Alam, M.Z., & Talukder, M.H. (2019). Molecular detection of Toxoplasma gondii from aborted fetuses of sheep, goats and cattle in Bangladesh. Veterinary Parasitology, Regional Studies and Reports, 18, article number 100347. doi: 10.1016/j.vprsr.2019.100347.

[3] Salehi, B., Amouei, A., Dodangeh, S., Daryani, A., Sarvi, S., Safari-Kharyeki, M.R., Salehi, S., Hosseini, S.A., & Hosseininejad, Z. (2021). Molecular identification of Neospora caninum infection in aborted fetuses of sheep, cattle, and goats in Mazandaran Province, Northern Iran. Iranian Journal of Parasitology, 16(3), 483-489. doi: 10.18502/ijpa.v16i3.7102.

[4] Duarte,  P.O., Oshiro,  L.M., Zimmermann,  N.P., Csordas,  B.G., Dourado,  D.M., Barros,  J.C., & Andreotti,  R. (2020). Serological and molecular detection of Neospora caninum and Toxoplasma gondii in human umbilical cord blood and placental tissue samples. Scientific Reports, 10(1), article number 9043. doi: 10.1038/s41598-020-65991-1.

[5] da Costa, M.A., Pinto-Ferreira,  F., de Almeida,  R., Martins,  F., Pires,  A.L., Mareze,  M., Mitsuka-Breganó,  R., Freire, R.L., da Rocha Moreira, R.V., Borges, J.M., & Navarro, I.T. (2020). Artisan fresh cheese from raw cow's milk as a possible route of transmission in a toxoplasmosis outbreak, in Brazil. Zoonoses and Public Health, 67(2), 122-129. doi: 10.1111/zph.12660.

[6] Deng, H., Swart, A., Bonačić Marinović, A.A., van der Giessen, J., & Opsteegh, M. (2020). The effect of salting on Toxoplasma gondii viability evaluated and implemented in a quantitative risk assessment of meat-borne human infection. International Journal of Food Microbiology, 314, article number 108380. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2019.108380.

[7] Alves, L., Lima, J., Melo, J., de Castro, A.M., Soares, V., Rossi, G., Teixeira, W., Ferreira, L., Cruz, B., Felippelli, G., Oliveira, V., Brom, P., Krawczak, F., da Costa, A.J., & Lopes, W. (2021). Spatial distribution of Toxoplasma gondii in cows and associated risk factors. Tropical Animal Health and Production, 53(1), 76. doi: 10.1007/s11250-020-02495-0.

[8] Gomes,  D., Mendes,  L.A., Dias,  J.M., Ribeiro-Andrade,  M., Oliveira,  P., Mota,  R.A., Arnhold,  E., Fioravanti,  M., & Oliveira, C. (2021). Seroprevalence, spatial distribution and risk factors associated with Toxoplasma gondii infection among cattle in a quilombola community in the Brazilian cerrado. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology, 30(1), article number 018720. doi: 10.1590/S1984-296120201080.

[9] de Azevedo Filho,  P., Ribeiro-Andrade,  M., Dos Santos, J.F., Dos Reis, A.C., de Araújo Valença,  S., Samico Fernandes, E., Pinheiro Junior, J.W., & Mota, R.A. (2020). Serological survey and risk factors for Toxoplasma gondii infection in cattle from Amazonas, Brazil. Preventive Veterinary Medicine, 176, article number 104885. doi: 10.1016/j. prevetmed.2020.104885.

[10] Gomes, D., Krawczak, F., Oliveira, C., Ferreira Júnior, Á., Fernandes, É., Lopes, W., Sevá, A., & Gennari, S.M. (2020). Toxoplasma gondii in cattle in Brazil: A review. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology, 29(1), article number e015719. doi: 10.1590/S1984-29612019106.

[11] Guimarães, A.M., Bruhn, F., da Rocha, C., de Araújo, T.H., & Mesquita, C. (2020). Seroepidemiology of Toxoplasma gondii in dairy cows in southeastern Brazil: Seropositive cows on all farms investigated. Acta Parasitologica, 65(3), 628-635. doi: 10.2478/s11686-019-00140-x.

[12] Kadesch, P., Hollubarsch, T., Gerbig, S., Schneider, L., Silva, L., Hermosilla, C., Taubert, A., & Spengler, B. (2020). Intracellular parasites Toxoplasma gondii and Besnoitia besnoiti, unveiled in single host cells using AP-SMALDI MS imaging. Journal of the American Society for Mass Spectrometry, 31(9), 1815-1824. doi: 10.1021/jasms.0c00043.

[13] Larrazabal, C., Silva, L., Hermosilla, C., & Taubert, A. (2021). Ezetimibe blocks Toxoplasma gondii-, Neospora caninumand Besnoitia besnoiti-tachyzoite infectivity and replication in primary bovine endothelial host cells. Parasitology, 148(9), 1107-1115. doi: 10.1017/S0031182021000822.

[14] Gossner,  A., & Hassan,  M.A. (2020). Transcriptional analyses identify genes that modulate bovine macrophage response to toxoplasma infection and immune stimulation. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology, 10, article number 437. doi: 10.3389/fcimb.2020.00437.

[15] Fereig, R.M., & Nishikawa, Y. (2022). Macrophage stimulation as a useful approach for immunoscreening of potential vaccine candidates against Toxoplasma gondii and Neospora caninum infections. Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.), 2411, 129-144. doi: 10.1007/978-1-0716-1888-2_8.

[16] Galat, М.V. (2014). Prevalence of toxoplasmosis among cattle in Ukraine. Scientific Bulletin of the National University of Life and Environmental Sciences of Ukraine. Series: Veterinary Medicine, Quality and Safety of Livestock Products, 201(1), 49-52.

[17] Galat, M., Must, K., Rissanen, K., & Jokelainen, P. (2019). Comparison of a commercial modified direct agglutination test and a commercial enzyme-linked immunosorbent assay for detection of antibodies against Toxoplasma gondii in domestic cats. Parasitology Research, 118, 2437-2441. doi: 10.1007/s00436-019-06368-w.

[18] Rissanen, K., Galat, M., Kovalenko, G., Rodnina, O., Mikharovskyi, G., Must, K., & Jokelainen, P. (2019). Toxoplasma gondii seroprevalence in horses from Ukraine: An investigation using two serological methods. Acta Parasitologica, 64, 687-692. doi: 10.2478/s11686-019-00040-0.

[19] Galat, M.V. (2020). Toxoplasmosis of animals (spreading, diagnostics and control measures) (Doctoral thesis, National University of Life and Environmental Sciences of Ukraine, Kyiv, Ukraine).

[20] Rehman, F., Shah, M., Ali, A., Ahmad, I., Sarwar, M.T., Rapisarda, A., & Cianci, A. (2020). Unpasteurised milk consumption as a potential risk factor for toxoplasmosis in females with recurrent pregnancy loss. Journal of Obstetrics and Gynaecology: The Journal of the Institute of Obstetrics and Gynecology, 40(8), 1106-1110. doi: 10.1080/01443615.2019.1702630.

[21] Wójcik-Fatla, A., Sroka, J., Zając, V., Sawczyn-Domańska, A., Kloc, A., Zwoliński, J., Kłapeć, T., Studzińska, M.B., Chmura, R., & Dutkiewicz, J. (2020). Potential sources of infection with selected zoonotic agents in the veterinary work environment  – pilot studies. Annals of Agricultural and Environmental Medicine: AAEM, 27(1), 146-150. doi: 10.26444/aaem/115363.

[22] Hajimohammadi, B., Ahmadian, S., Firoozi, Z., Askari, M., Mohammadi, M., Eslami, G., Askari, V., Loni, E., BarzegarBafrouei,  R., & Boozhmehrani,  M.J. (2022). A meta-analysis of the prevalence of toxoplasmosis in livestock and poultry worldwide. EcoHealth, 1-20. doi: 10.1007/s10393-022-01575-x.

[23] Gazzonis, A.L., Marino, A., Garippa, G., Rossi, L., Mignone, W., Dini, V., Giunta, R.P., Luini, M., Villa, L., Zanzani, S.A., & Manfredi,  M.T. (2020). Toxoplasma gondii seroprevalence in beef cattle raised in Italy: A multicenter study. Parasitology Research, 119(11), 3893-3898. doi: 10.1007/s00436-020-06878-y.

[24] Gharekhani,  J., & Yakhchali,  M. (2020). Risk factors associated to Toxoplasma gondii infection in dairy farms in Hamedan suburb, Iran. Journal of Parasitic Diseases: Official Organ of the Indian Society for Parasitology, 44(1), 116-121. doi: 10.1007/s12639-019-01167-7.

[25] Gharekhani, J., Yakhchali, M., Afshari, A., & Adabi, M. (2021). Herd-level contamination of Neospora caninum, Toxoplasma gondii and Brucella in milk of Iranian dairy farms. Food Microbiology, 100, 103873. doi: 10.1016/j.fm.2021.103873.

[26] Djellata, N., Yahimi, A., Hanzen, C., Saegerman, C., & Kaidi, R. (2019). Prevalence and factors associated with a higher or lower risk of exposure to Coxiella burnetii, Chlamydia abortus and Toxoplasma gondii in dairy cows that have aborted in Algeria. Revue Scientifique et Technique (International Office of Epizootics),38(3), 761-786. doi: 10.20506/rst.38.3.3025.

[27] Gong, Q.L., Li, J., Li, D., Tian, T., Leng, X., Li, J.M., Shi, K., Zhang, N.Z., Du, R., & Zhao, Q. (2020). Seroprevalence of Toxoplasma gondii in cattle in China from 2010 to 2019: A systematic review and meta-analysis. Acta Tropica, 211, article number 105439. doi: 10.1016/j.actatropica.2020.105439.

[28] Ibrahim, H.M., Abdel-Rahman, A., & Bishr, N.M. (2021). Seroprevalence of Neospora caninum and Toxoplasma gondii IgG and IgM antibodies among buffaloes and cattle from Menoufia Province, Egypt. Journal of Parasitic Diseases: Official Organ of the Indian Society for Parasitology, 45(4), 952-958. doi: 10.1007/s12639-021-01386-x.

[29] Khattab, R.A., Barghash, S.M., Mostafa, O., Allam, S.A., Taha, H.A., & Ashour, A. (2022). Seroprevalence and molecular characterization of Toxoplasma gondii infecting ruminants in the North-West of Egypt. Acta Tropica, 225, article number 106139. doi: 10.1016/j.actatropica.2021.106139.

[30] Blaga, R., Aubert, D., Thébault, A., Perret, C., Geers, R., Thomas, M., Alliot, A., Djokic, V., Ortis, N., Halos, L., Durand, B., Mercier, A., Villena, I., & Boireau, P. (2019). Toxoplasma gondii in beef consumed in France: Regional variation in seroprevalence and parasite isolation. Parasite, 26, article number 77. doi: 10.1051/parasite/2019076.

[31] Bărburaș, D., Gyӧrke, A., Blaga, R., Bărburaș, R., Kalmár, Z., Vişan, S., Mircean, V., Blaizot, A., & Cozma, V. (2019). Toxoplasma gondii in water buffaloes (Bubalus bubalis) from Romania: What is the importance for public health? Parasitology Research, 118(9), 2695-2703. doi: 10.1007/s00436-019-06396-6.

[32] Azimi, K., Amouei, A., Sharif, M., Sarvi, S., Shams, N., Mizani, A., Hosseini, S.A., Salehi, S., Safari-Kharyeki, M.R., Chegeni,  T.N., Hosseininejad,  Z., & Daryani, A. (2021). Diagnosis of toxoplasmosis in ruminants aborted fetuses in northern Iran using molecular and bioassay techniques. Iranian Journal of Parasitology, 16(2), 229-235. doi: 10.18502/ijpa.v16i2.6273.

[33] Zanatto, D., Gatto, I., Labruna, M.B., Jusi, M., Samara, S.I., Machado, R.Z., & André, M.R. (2019). Coxiella burnetii associated with BVDV (Bovine Viral Diarrhea Virus), BoHV (Bovine Herpesvirus), Leptospira spp., Neospora caninum, Toxoplasma gondii and Trypanosoma vivax in reproductive disorders in cattle. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology, 28(2), 245-257. doi: 10.1590/S1984-29612019032.

[34] Villagra-Blanco,  R., Barrantes-Granados,  O., Montero-Caballero,  D., Romero-Zúñiga,  J.J., & Dolz,  G. (2019). Seroprevalence of Toxoplasma gondii and Neospora caninum infections and associated factors in sheep from Costa Rica. Parasite Epidemiology and Control, 4, article number e00085. doi: 10.1016/j.parepi.2019.e00085.

[35] Lindsay,  D.S., & Dubey,  J.P. (2020). Neosporosis, toxoplasmosis, and sarcocystosis in ruminants: An Update. The Veterinary Clinics of North America. Food Animal Practice, 36(1), 205-222. doi: 10.1016/j.cvfa.2019.11.004.

[36] Amdouni, Y., Rjeibi, M.R., Awadi, S., & Gharbi, M. (2021). Molecular identification of Neospora caninum and co-infection with Toxoplasma gondii in genital apparatus of naturally infected cows in North Tunisia. Tropical Animal Health and Production, 53(6), 528. doi: 10.1007/s11250-021-02975-x.

[37] Amouei, A., Sharif, M., Sarvi, S., Bagheri Nejad, R., Aghayan, S.A., Hashemi-Soteh, M.B., Mizani, A., Hosseini, S.A., Gholami, S., Sadeghi, A., Sarafrazi, M., & Daryani, A. (2019). Aetiology of livestock fetal mortality in Mazandaran province, Iran. PeerJ, 6, article number 5920. doi: 10.7717/peerj.5920.

[38] Fazel, R., Rezanezhad, H., Solhjoo, K., Kalantari, M., Erfanian, S., Armand, B., & Jahromi, M.E. (2021). PCR-based detection of Toxoplasma gondii from cattle in southern Iran. Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases, 77, article number 101677. doi: 10.1016/j.cimid.2021.101677.

[39] Dubey, J.P., Murata, F., Cerqueira-Cézar, C.K., Kwok, O., & Yang, Y.R. (2020). Public health significance of Toxoplasma gondii infections in cattle: 2009-2020. The Journal of Parasitology, 106(6), 772-788. doi: 10.1645/20-82.

[40] de Barros, L.D., Garcia, J.L., Bresciani, K., Cardim, S.T., Storte, V.S., & Headley, S.A. (2020). A review of toxoplasmosis and neosporosis in water buffalo (Bubalus bubalis). Frontiers in Veterinary Science, 7, article number 455. doi: 10.3389/fvets.2020.00455.

[41] Dean, A.G., Sullivan, K.M., & Soe, M.M. (2022). OpenEpi: Open source epidemiologic statistics for public health, version. Retrieved from http://www.OpenEpi.com.

[42] Prokopenko, O. (Ed.). (2018). Livestock of Ukraine. Statistical collection. Kyiv: State Statistics Service.

[43] Liu,  F., Wang,  D., Yang,  S.C., Zhu,  J.H., Li,  J.M., Shi,  K., Du,  R., & Zhao,  Q. (2019). Prevalence and risk factors of brucellosis, toxoplasmosis, and neosporosis among yanbian yellow cattle in Jilin province, China. Vector Borne and Zoonotic Diseases, 19(3), 217-221. doi: 10.1089/vbz.2018.2288.

[44] Sun, T., Rahman, S.U., Cai, J., Zeng, J., Mi, R., Zhang, Y., Gong, H., Ma, H., Huang, Y., Han, X., Zhao, Q., & Chen, Z. (2021). Seroprevalence and associated risk factors of Toxoplasma gondii infection in yaks (Bos grunniens) on the Qinghai-Tibetan Plateau of China. Parasite, 28, article number 43. doi: 10.1051/parasite/2021043.

[45] Olsen, A., Berg, R., Tagel, M., Must, K., Deksne, G., Enemark, H.L., Alban, L., Johansen, M.V., Nielsen, H.V., Sandberg, M., Lundén, A., Stensvold, C.R., Pires, S.M., & Jokelainen, P. (2019). Seroprevalence of Toxoplasma gondii in domestic pigs, sheep, cattle, wild boars, and moose in the Nordic-Baltic region: A systematic review and meta-analysis. Parasite Epidemiology and Control, 5, article number 00100. doi: 10.1016/j.parepi.2019.e00100.

[46] Sroka, J., Karamon, J., Wójcik-Fatla, A., Piotrowska, W., Dutkiewicz, J., Bilska-Zając, E., Kochanowski, M., Dąbrowska, J., & Cencek,  T. (2020). Toxoplasma gondii infection in slaughtered pigs and cattle in Poland: Seroprevalence, molecular detection and characterization of parasites in meat. Parasites & Vectors, 13(1), article number 223. doi: 10.1186/s13071-020-04106-1.

[47] Odeniran, P.O., Omolabi, K.F., & Ademola, I.O. (2020). A meta-analysis of Toxoplasma gondii seroprevalence, genotypes and risk factors among food animals in West African countries from public health perspectives. Preventive Veterinary Medicine, 176, article number 104925. doi: 10.1016/j.prevetmed.2020.104925.

[48] Ma, L., Li, S., Zhang, Y., & Wen, Z. (2021). Seroprevalence of Toxoplasma gondii and Neospora caninum in dairy cows in Hebei province, China. Animal Biotechnology, 32(4), 451-453. doi: 10.1080/10495398.2020.1714636.

[49] Ouchetati, I., Ouchene-Khelifi, N.A., Ouchene, N., Khelifi, M., Dahmani, A., Haïf, A., Zeroual, F., & Benakhla, A. (2021). Prevalence of Toxoplasma gondii infection among animals in Algeria: A systematic review and meta-analysis. Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases, 74, article number 101603. doi: 10.1016/j.cimid.2020.101603.

[50] Pereira, D.C., Dubey, J.P., Da Mata, A., Neto, H., Cardoso, L., & Lopes, A.P. (2020). Seroepidemiology of Toxoplasma gondii in domestic cattle, sheep, goats and pigs from São Tomé and Príncipe. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology, 29(1), article number 014819. doi: 10.1590/S1984-29612019101.

[51] Maia,  M.O., de Almeida,  S., Schmidt,  A.C., de Oliveira,  A., de Aguiar,  D.M., Dos Santos-Doni,  T.R., & de Campos Pacheco, R. (2021). High prevalence of anti-Toxoplasma gondii antibodies in beef cattle in Midwestern Brazil. Veterinary Research Communications, 45(4), 399-407. doi: 10.1007/s11259-021-09820-4.

[52] Silva, B.M., Queiroz, W., Maia, M.O., Pacheco, R.C., Aguiar, D.M., Campos, M.S., Bresciani, K., Costa, A.J., Gomes, A., & Santos-Doni, T.R. (2021). Seroprevalence and risk factors of Toxoplasma gondii in cattle from Unai, Minas Gerais state, Brazil. Veterinary Parasitology, Regional Studies and Reports, 25, article number 100610. doi: 10.1016/j.vprsr.2021.100610.

[53] Tialla, D., Dahourou, L.D., & Gbati, O.B. (2019). Seroprevalence and factors associated with bovine and swine toxoplasmosis in Bobo-Dioulasso, Burkina Faso. Veterinary World, 12(10), 1519-1523. doi: 10.14202/vetworld.2019.1519-1523.

[54] Lambooij, M.S., Veldwijk, J., van Gils, P., Mangen, M.J., Over, E., Suijkerbuijk, A., Polder, J., de Wit, G.A., & Opsteegh, M. (2019). Consumers' preferences for freezing of meat to prevent toxoplasmosis – A stated preference approach. Meat Science, 149, 1-8. doi: 10.1016/j.meatsci.2018.11.001.

[55] Shariatzadeh, S.A., Sarvi, S., Hosseini, S.A., Sharif, M., Gholami, S., Pagheh, A.S., Montazeri, F., Nayeri, T., Nakhaei, M., Mikaeili Galeh,  T., & Daryani,  A. (2021). The global seroprevalence of Toxoplasma gondii infection in bovines: A systematic review and meta-analysis. Parasitology, 148(12), 1417-1433. doi: 10.1017/S0031182021001116.

[56] Ammar, A.I., Moharm, I.M., Shaapan, R.M., & Rady, A.A. (2020). Toxoplasma gondii infection in cattle egret (Bubulcus ibis): First report from Shebin El-Kom, Menoufia Governorate, Egypt. Pakistan Journal of Biological Sciences: PJBS, 23(11), 1442-1449. doi: 10.3923/pjbs.2020.1442.1449.